Методика непрямого базофильного теста

БАЗОФИЛЬНЫЙ ТЕСТ

Базофильный тест (греческий basis основа + philia склонность; синоним тест Шелли) — метод диагностики специфической сенсибилизации организма, основанный на дегрануляции базофилов после добавления к ним специфического аллергена (рис.). Предложен Шелли (W. В. Shelley) в 1962 году. В последующие годы базофильный тест использован различными исследователями для изучения пыльцевой, лекарственной и пищевой аллергии. Базофильный тест получил признание как дополнительный тест для диагностики аллергических заболеваний и как метод выявления аллергических антител человека. Базофильные лейкоциты крови подобно тканевым тучным клеткам принимают участие в освобождении гистамина, гепарина, медленно реагирующей субстанций и серотонина. Считают, что реакция дегрануляции базофилов крови свидетельствует о наличии реакции аллерген — антитело (см. Антиген-антитело реакция). Природа антител, обусловливающих реакцию дегрануляции, остается неясной. Наиболее вероятно, что это реагины (см. Антитела, аллергические).

Существует две разновидности базофильного теста: 1) прямой тест, при к-ром реакция дегрануляции воспроизводится на спонтанно сенсибилизированных базофилах больного (лейкоциты больного + аллерген); 2) непрямой тест, при котором реакция дегрануляции воспроизводится на базофилах кролика или здорового человека (лейкоциты + исследуемая сыворотка больного + аллерген); в реакции лучше использовать лейкоциты кролика, содержащие много базофилов (4—12%). Непрямой тест получил большее распространение.

Материалы, используемые для прямого базофильного теста: 1) свежая кровь больного; 2) аллерген, повышенную чувствительность к которому предполагается исследовать; 3) фиксирующий раствор (6 мл этанола, 2 мл хлороформа и 2 мл ацетона); 4) целлюлозные мембранные фильтры.

Методика прямого базофильного теста

Смешивают 0,25 мл гепаринизированной крови больного и 0,025 мл аллергена. Через 5 минут к 0,1 мл смеси добавляют охлажденный фиксирующий раствор, который разрушает эритроциты, оставляя интактными лейкоциты. После фиксации в течение ночи при t° 4° лейкоциты ресуспензируют и фильтруют через целлюлозные мембранные фильтры в течение 20 минут. При этом базофилы остаются на фильтрах. Фильтры окрашивают в течение 30 секунд раствором толуидинового синего, обезвоживают в этаноле и просветляют в ксилоле. Подсчитывают 20 базофилов. Их классифицируют по размеру, окраске, числу и локализации базофильных гранул. Для «истощенных» базофилов характерно: 1) небольшое количество гранул; 2) небольшие слабо окрашенные гранулы; 3) значительное количество гранул, расположенных за пределами клетки. Тест считается положительным, если «истощено» (дегранулирует) больше половины базофилов.

Материалы, используемые для непрямого базофильного теста: 1) свежая или сохраняемая при t°—20° сыворотка крови больного; 2) аллерген; 3) концентрированная взвесь лейкоцитов кролика, полученная при центрифугировании гепаринизированной крови со скоростью 3000 об/мин в течение 5 минут в тонких стеклянных пробирках или полиэтиленовых трубочках; 4) предметные стекла, окрашенные раствором нейтральрота. Для каждого аллергена опытным путем подбирают ту концентрацию, которая не вызывает неспецифических изменений базофилов.

Методика непрямого базофильного теста

На окрашенное нейтральротом предметное стекло наносят одинаковое количество (по 0,005 мл) лейкоцитарной взвеси, исследуемой сыворотки больного и аллергена. Предметное стекло накрывают покровным, края которого смазаны вазелином, и ставят на 10 минут в термостат (при 37°). Параллельно ставят контрольные пробы: 1) исследуемая сыворотка со взвесью лейкоцитов (чтобы исключить неспецифическую дегрануляцию); 2) взвесь лейкоцитов с аллергеном. Реакцию наблюдают под микроскопом с иммерсией. Считают не менее 20 базофилов. Основные признаки повреждения базофилов следующие: разбухание и потеря сферичности, гранулолизис, выход гранул из клеток. Полное разрушение клетки с выходом гранул в окружающую среду («взрывчатая» дегрануляция) наблюдается крайне редко.

Выделяют три степени реакции дегрануляции: 1) слабая реакция (+)— дегрануляция при базофильном тесте превышает таковую в контроле на 10%; 2) умеренная реакция (+ +) — превышение дегрануляции в контроле на 15%; 3) резко положительная (+ + +) — превышение дегрануляции в контроле на 20% и более. Критерием положительного базофильного теста можно считать исчезновение гранул более чем у 70% базофилов. Ценность представляют только четко положительные результаты, а отрицательные не исключают состояния повышенной чувствительности к данному аллергену.

Библиогр.: Ишимова Л. М. и 3еличенко Л. И. Аллергические реакции форменных элементов крови и их значение для диагностики, в кн.: Аллергич. заболевания у детей, под ред. М. Я. Студеникина и Т. С. Соколовой, с. 144, М., 1971; Польнер А. А. Реакция дегрануляции базофильных лейкоцитов при аллергии к растительной пыльце, Тер. арх., г. 40, № 2, с. 103, 1968; Shelley W. В. New serologicai test for allergy in man, Nature (Lond.), v. 195, p. 1181, 1962; он жe, Indirect basophil degranulation test for allergy to penicillin and other drugs, J. Amer. med. Ass., v. 184, p. 171, 1963.

Источник

Реакция дегрануляции тучных клеток тест диагностика

Мастоцитоз: клинические проявления, методы диагностики и тактика ведения пациентов

Мастоцитоз – это группа заболеваний, обусловленных накоплением и пролифирацией тучных клеток в тканях. Описаны этиопатогенез и классификация мастоцитоза, клиническая картина и подходы к диагностике и лечению, включая профилактику осложнений.

Мастоцитоз — это группа заболеваний, обусловленных накоплением и пролиферацией тучных клеток в тканях [1]. Впервые его описали E. Nettleship и W. Tay в 1869 г. как хроническую крапивницу, оставлявшую после себя бурые пятна. В 1878 г. A. Sangster предложил для обозначения подобных высыпаний термин «пигментная крапивница». Природа этих высыпаний была выявлена в 1887 г. немецким дерматологом P. Unna в результате гистологических исследований. В 1953 г. R. Degos ввел термин «мастоцитоз».

Мастоцитоз — довольно редкая болезнь. В РФ на 1000 пациентов приходится 0,12–1 случая мастоцитоза [2]. Детские дерматологи видят таких пациентов чаще. Так, в международном руководстве по дерматологии «Andrews’ Diseases of the Skin. Clinical Dermatology» указывают на соотношение 1 случай на 500 пациентов детского возраста [3]. Возможно, в РФ имеет место гиподиагностика мастоцитоза. Оба пола поражаются одинаково часто. На долю мастоцитоза у детей приходится значительная часть, причем у детей мастоцитоз, как правило, ограничивается поражением кожи, а у взрослых чаще развивается системный мастоцитоз (СМ). Знание проявлений СМ и тактики ведения таких пациентов помогает предотвратить возможные серьезные осложнения, которые могут сопровождать не только агрессивный СМ, но и кожный, не системный мастоцитоз, протекающий доброкачественно. К таким осложнениям относятся анафилаксия, крапивница и ангионевротический отек, гастроинтестинальные нарушения и др.

Биология тучных клеток и этиопатогенез мастоцитоза

Этиология болезни неизвестна. Тучные клетки были впервые описаны P. Ehrlich в 1878 г. и названы так из-за особой окраски крупных гранул. Внешний вид этих гранул привел к ошибочному мнению ученого о том, что они существуют, чтобы кормить окружающие ткани (отсюда название клеток «Mastzellen», от немецкого Mast, или «откорм» животных). В настоящее время тучные клетки рассматриваются как очень мощные клетки иммунной системы, участвующие во всех воспалительных процессах и, особенно, IgE-опосредованных механизмах.

Тучные клетки широко распространены почти во всех органах. Они близко расположены к кровеносным и лимфатическим сосудам, периферическим нервам и эпителиальным поверхностям, что позволяет им выполнять различные регуляторные, защитные функции и участвовать в воспалительных реакциях. Тучные клетки развиваются из плюрипотентных клеток-предшественников костного мозга, экспрессирующих на своей поверхности антиген CD34. Отсюда они рассеиваются в виде предшественников и подвергаются пролиферации и созреванию в определенных тканях. Нормальное развитие тучных клеток требует взаимодействия между фактором роста тучных клеток, цитокинов и рецепторов c-KIT, которые экспрессируются на тучных клетках в различных стадиях их развития. Фактор роста тучных клеток связывает белковый продукт протоонкогена c-KIT. В дополнение к стимуляции пролиферации тучных клеток, фактор их роста стимулирует разрастание меланоцитов и синтез меланина. С этим связана гиперпигментация высыпаний на коже при мастоцитозе. Тучные клетки могут быть активированы IgE-опосредованными и не-IgE-зависимыми механизмами, в результате чего высвобождаются различные химические медиаторы, которые накапливаются в секреторных гранулах; одновременно происходит синтез мембранных липидных метаболитов и воспалительных цитокинов (триптаза, гистамин, серотонин; гепарин; тромбоксан, простагландин D2, лейкотриен C4; фактор активации тромбоцитов, фактор хемотаксиса эозинофилов; интерлейкины-1, 2, 3, 4, 5, 6; а также др.) [4]. Эпизодическое высвобождение медиаторов из тучных клеток, которые подверглись чрезмерной пролиферации, приводит к широкому спектру симптомов. Такая гиперпролиферация может представлять собой реактивную гиперплазию или опухолевый процесс. Нарушения рецепторов c-KIT или избыточная продукция их лигандов, возможно, приводят к неупорядоченной клеточной пролиферации. Мутация в локусе гена c-KIT вызывает конституциональную активацию и усиление его экспрессии на тучных клетках. Считается, что именно такая клональная пролиферация играет основную роль в патогенезе мастоцитоза [5].

Известны два типа мутаций, ведущих к развитию мастоцитоза у взрослых: мутация протоонкогена с-KIT (чаще всего) и другие мутации (табл. 1). Белок этого гена — трансмембранный рецептор тирозинкиназы (CD117), лиганд которого является фактором стволовых клеток (фактор роста тучных клеток). Мутация в кодоне 816 названного протоонкогена ведет к опухолевой трансформации тучных клеток. Изредка можно обнаружить и другие мутации c-KIT [1] (табл. 1).

Другая мутация может происходить в хромосоме 4q12 в виде делеции этого участка хромосомы. Это приводит к патологическому сближению (юкстапозиции) гена рецептора альфа фактора роста, продуцируемого тромбоцитами, и гена FIP1L1. В результате слияния этих генов происходит активация гемопоэтических клеток и гиперпролиферация тучных клеток и эозинофилов. Эта же мутация обусловливает развитие гиперэозинофильного синдрома.

У детей редко наблюдаются вышеуказанные генные мутации. Заболевание, как правило, не имеет семейный характер, за исключением редких случаев аутосомно-доминантного типа наследования с пониженной экспрессивностью (табл. 1). Мастоцитоз у детей связан со спонтанными случаями цитокин-обусловленной гиперплазии тучных клеток, мутациями гена c-KIT, отличных от кодона 816, или с другими до сих пор неизвестными мутациями.

Согласно Консенсусу по стандартам и стандартизации мастоцитоза 2005 г. [1], в биоптате следует определить такие маркеры, как:

1) CD2 — T-клеточный поверхностный антиген (в норме содержится на Т-лимфоцитах, естественных киллерах, тучных клетках). Отсутствие этого антигена на тучных клетках говорит о том, что инфильтрация тучными клетками не связана с мастоцитозом;

2) CD34 — маркер адгезивной молекулы, экспрессированный на тучных клетках, эозинофилах, стволовых клетках;

3) CD25 — альфа-цепь интерлейкина-2, экспрессируется на активированных В- и Т-лимфоцитах, на некоторых опухолевых клетках, включая тучные клетки. CD25 является маркером СМ;

4) CD45 — общий лейкоцитарный антиген, присутствующий на поверхности всех представителей кроветворных рядов, кроме зрелых эритроцитов. В норме находится на поверхности тучных клеток;

5) CD117 — трансмембранный рецептор c-KIT, находится на поверхности всех тучных клеток;

6) антитела к триптазе.

Современная классификация мастоцитоза была предложена C. Akin и D. Metcalfe, которая считается классификацией ВОЗ (2001 г.) (табл. 2) [3].

Клиника и диагностика мастоцитоза

Различают кожный и системный мастоцитоз. Кожной формой страдают преимущественно дети и редко — взрослые. Детский мастоцитоз делят по распространенности на следующие три категории: самая частая форма (60–80% случаев) — пигментная крапивница; реже (10–35%) наблюдаются случаи солитарной мастоцитомы; еще более редкие формы — диффузный кожный мастоцитоз или телеангиэктатический тип. Заболевание возникает обычно в течение первых двух лет жизни ребенка (75% случаев). К счастью, кожный мастоцитоз у детей склонен к спонтанному регрессу [2]. Значительная часть взрослых пациентов имеет СМ, так как типично они имеют клональную пролиферацию тучных клеток из костного мозга. Среди взрослых с СМ, не ассоциированным с гематологическим заболеванием, 60% имеют вялотекущее заболевание и 40% — агрессивный мастоцитоз (такие пациенты обычно не имеют кожных проявлений). Симптомы СМ определяются в зависимости от локализации инфильтратов и медиаторов, выбрасываемых тучными клетками, и включают: зуд, флашинг (внезапное покраснение кожи, особенно лица и верхней части туловища), уртикарию и ангионевротический отек, головные боли, тошноту и рвоту, приступообразные боли в животе, диарею, язву 12-перстной кишки и/или желудка, мальабсорбцию, астма-подобные симптомы, предобморочные и обморочные состояния, анафилаксию. Эти симптомы могут возникать спонтанно или быть результатом факторов, способствующих дегрануляции тучных клеток (например, употребление алкоголя, морфина, кодеина или трение больших участков кожи). Нередко у таких больных укусы насекомых могут вызвать анафилаксию. Гиперреактивность на некоторые неспецифические факторы (например, прием Аспирина и других нестероидных противовоспалительных средств, холод, контакт с водой), вызывающие выраженные проявления острой рецидивирующей или хронической уртикарии, могут быть также проявлением СМ. В крови у таких пациентов нет повышения уровня общего IgЕ и редко обнаруживают специфические IgЕ-антитела, поскольку у таких больных аллергия может быть не чаще, чем у общей популяции. В то же время стабильно повышенный уровень триптазы в крови является признаком СМ. Так как тучные клетки продуцируют гепарин, это может приводить к носовым кровотечениям, кровавой рвоте, мелене, экхимозам. У больных с СМ чаще встречаются спонтанные переломы вследствие остеопороза. Вероятно, остеопороз обусловлен нарушением баланса между остеобластами и остеокластами в сторону активизации последних под действием гепарина [6].

Некоторые авторы предлагают включить еще одно заболевание в классификацию мастоцитоза — «мастоцитоз костного мозга». При этом изолированном варианте мастоцитоза наблюдается невысокое содержание тучных клеток в других тканях, низкий уровень триптазы в крови и хороший прогноз. Предположить это заболевание можно в случаях необъяснимых признаков анафилаксии, остеопороза неясной этиологии, необъяснимых неврологических и конституциональных симптомов, необъяснимых язвах кишечника или хронической диарее [1].

Дифференциальный диагноз мастоцитоза очень широк и зависит от проявлений заболевания (табл. 3) [7].

Более подробно остановимся на кожной форме мастоцитоза.

Обычно диагноз кожного мастоцитоза не вызывает затруднений у опытного дерматолога. Однако автор статьи неоднократно встречался с ошибочной диагностикой этого заболевания как у детей, так и у взрослых. Кожный мастоцитоз у детей проявляется в трех формах: солитарная мастоцитома; пигментная крапивница и диффузный кожный мастоцитоз (последний наблюдается крайне редко). Возможно сочетание этих форм у одного и того же ребенка. У детей, как правило, диагноз ставят на основании клинической картины, без гистологического исследования. Это оправдано тем, что у детей кожный мастоцитоз обычно проходит самопроизвольно в течение нескольких лет. Однако, поскольку речь идет о пролиферативном заболевании гематологической природы, всегда лучше провести гистологическое и иммуногистохимическое исследование биоптата. Особенно важно провести такой анализ в тех случаях, когда высыпания появились в возрасте после 15 лет (проявление СМ). P. Valent et al. [1] указывают на следующие критерии диагноза кожного мастоцитоза: типичные клинические проявления (главный критерий) и один или два из следующих малых критериев: 1) мономорфный инфильтрат из тучных клеток, который состоит либо из агрегатов триптаза-позитивных тучных клеток (более 15 клеток в кластере), либо — рассеянных тучных клеток (более 20 в поле зрении при большом (×40) увеличении); 2) обнаружение с-KIT-мутации в кодоне 816 в тканях биоптата из очага поражения.

P. Vaent et al. [1] предложили определять степень тяжести кожных проявлений мастоцитоза. Кроме оценки площади поражения кожи, авторы предлагают распределить тяжесть высыпаний на пять степеней, в зависимости от наличия сопутствующих симптомов, которыми могут сопровождаться проявления на коже — зуд, флашинг и образование пузырей (табл. 4).

Источник

Триптаза

Определение в крови концентрации триптазы — главного клинико-лабораторного маркера активации мастоцитов (тучных клеток), используемое для диагностики мастоцитоза и аллергических реакций.

Маркер активации мастоцитов (тучных клеток); маркер мастоцитоза.

Иммунофлюоресценция на твердой фазе (ImmunoCAP).

Мкг/л (микрограмм на литр).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Триптаза – это трипсиноподобный фермент, обнаруживаемый в гранулах мастоцитов (тучных клетках) и базофилов. Концентрация триптазы в мастоцитах примерно в 300 раз больше, чем в базофилах. Существует 5 изоформ этого фермента (альфа, бета, гамма, дельта и эпсилон), причем бета-триптаза – это преобладающая в гранулах мастоцитов изоформа. Физиологическая роль триптазы до конца не ясна, однако известны ее разнообразные провоспалительные эффекты, в том числе инактивация бронхорасширяющих медиаторов, разрушение вазоактивного интестинального пептида, усиление проницаемости сосудистой стенки и экспрессии молекул адгезии VCAM-1. В результате активации и дегрануляции мастоцитов уровень триптазы в крови возрастает.

Активация мастоцитов сопровождается характерными «аллергическими» симптомами в виде кожного зуда, крапивницы, ринореи, чихания, кашля и слезотечения и может иногда достигать степени анафилаксии. Эти признаки, однако, не всегда говорят об аллергии, они также могут наблюдаться при системном мастоцитозе и других миелопролиферативных заболеваниях, для которых характерна активация мастоцитов и повышение уровня триптазы в крови даже без какого-либо аллергена. Для дифференциальной диагностики заболеваний, протекающих с симптомами активации мастоцитов, проводят лабораторные исследования, в том числе анализ на триптазу крови.

Не существует единого мнения о том, какой уровень повышения триптазы считается патологическим. Считается, что превышение концентрации триптазы более 20 нг/мл от нормального значения (менее 10-15 нг/мл) или по крайней мере на 20 % от повышенного значения (более 15 нг/мл) свидетельствует об активации мастоцитов.

Уровень триптазы рекомендуется исследовать несколько раз: на фоне клинических симптомов заболевания, через несколько часов и через несколько дней после прекращения симптомов. Время полужизни триптазы больше, чем, например, гистамина, что делает триптазу очень удобным клинико-лабораторным маркером активации мастоцитов. Пациенты с повышенным базовым уровнем триптазы должны быть обследованы на предмет мастоцитоза. Стойкое повышение уровня триптазы более 20 нг/мл является одним из малых критериев диагностики мастоцитоза. Концентрация триптазы обычно достигает высоких значений (более 200 нг/мл) при агрессивном течении системного мастоцитоза. На фоне применения иммуносупрессивных препаратов концентрация триптазы снижается, поэтому этот клинико-лабораторный маркер может быть использован для контроля лечения мастоцитоза. Следует отметить, что стойкое повышение триптазы – характерный, но не абсолютно специфический признак мастоцитоза (специфичность – около 98 %). Оно может наблюдаться и при других миелопролиферативных заболеваниях, хронической почечной недостаточности и даже у здоровых людей. Также чувствительность анализа на триптазу в отношении мастоцитоза составляет около 83 %, поэтому отрицательный результат не позволяет исключить заболевание.

Нормализация уровня триптазы через 12-14 часов после прекращения симптомов, напротив, свидетельствует скорее об аллергическом эпизоде. Интересно, что у некоторых пациентов с очевидными симптомами анафилаксии уровень триптазы остается в пределах нормы. Это может быть отчасти обусловлено эффектами триптазы (при локальном нарастании ее концентрации, например при отеке гортани, не сопровождающемся повышением уровня триптазы в крови) или преимущественным участием базофилов, а не мастоцитов, в патогенезе анафилактической реакции у данного пациента. Таким образом, так же как и в случае с мастоцитозом, отрицательный результат теста не исключает анафилаксию.

Исследование триптазы может быть дополнено исследованием других медиаторов мастоцитов (гистамина, лейкотриенов и простагландинов), а также общего и специфических иммуноглобулинов IgE. При подозрении на аллергию через 4-6 недель после эпизода заболевания целесообразно провести кожные аллергические пробы.

Для чего используется исследование?

Для дифференциальной диагностики заболеваний, протекающих с симптомами активации мастоцитов (анафилактические реакции, системный мастоцитоз);
для контроля лечения мастоцитоза с помощью иммуносупрессивных препаратов.

Когда назначается исследование?

При наличии симптомов активации мастоцитов: кожного зуда, крапивницы, ринореи, чихания, кашля, одышки, боли в грудной клетке, слезотечения, гипотензии, боли в области живота, нарушения ритма сердца, потери сознания и других;
при наличии пигментной крапивницы;
при лечении мастоцитоза иммуносупрессивными препаратами.

Что означают результаты?

Референсные значения: ‹ 11 мкг/л.

мастоцитоз;
острый миелобластный лейкоз;
миелодиспластические синдромы;
гиперэозинофильный синдром;
аллергия;
формирование рубца;
интоксикация героином;
инфаркт миокарда;
политравма;
гипоксия;
хроническая почечная недостаточность.

норма;
локальная активация мастоцитов (например, отек гортани);
особые случаи анафилаксии, преимущественно опосредованные дегрануляцией базофилов;
эффективное лечение заболевания.

Что может влиять на результат?

Время, прошедшее с момента появления симптомов;
форма мастоцитоза (наиболее выраженное повышение триптазы наблюдается при агрессивном течении системного мастоцитоза).

Повторные анализы рекомендуется выполнять с помощью одних и тех же тест-систем, то есть в одной лаборатории;
результат анализа оценивают с учетом данных анамнестических, клинических и других лабораторных исследований.

[21-090] Определение специфических IgG к 90 наиболее часто встречаемым пищевым аллергенам

[21-673] Аллергочип ImmunoCAP ISAC (112 аллергокомпонентов)

[21-675] Фадиатоп (ImmunoCAP)

Кто назначает исследование?

Аллерголог, дерматолог, терапевт, педиатр, врач общей практики.

Литература

Sandes AF, Medeiros RS, Rizzatti EG. Diagnosis and treatment of mast cell disorders: practical recommendations. Sao Paulo Med J. 2013;131(4):264-74.
Michalska-Krzanowska G. Tryptase in diagnosing adverse suspected anaphylactic reaction. Adv Clin Exp Med. 2012 May-Jun;21(3):403-8. Review.
Valent P, Horny HP, Triggiani M, Arock M. Clinical and laboratory parameters of mast cell activation as basis for the formulation of diagnostic criteria. Int Arch Allergy Immunol. 2011;156(2):119-27.

Источник

Диагностика лекарственной аллергии. Лабораторные методы (in vitro)

Диагностика
В диагностике лекарственной аллергии выделяют следующие основные моменты:

сбор аллергологического анамнеза;
методы диагностики лекарственной аллергии in vitro (лабораторная диагностика);
методы диагностики лекарственной аллергии in vivo (провокационные тесты на больном).

Сбор аллергологического анамнеза является важным этапом в диагностике лекарственной аллергии. Необходимо уточнить:

страдает ли сам больной или его родственники какими-либо аллергическими заболеваниями;
есть ли профессиональный контакт с медикаментами;
были ли прежде аллергические реакции на лекарственные препараты, через какой интервал времени после приема они развивались (быстрые/замедленные). Необходимо выяснить характер этих реакций конкретно на каждый препарат (укладываются ли они в представления об аллергических реакциях или относятся к другим нежелательным реакциям);
возникали ли аллергические реакции от применения наружных средств (лечебных мазей, кремов и других форм), которые могут быть обусловлены как лекарствами, входящими в их состав, так и мазевой основой или консервантами, красителями;
как пациент переносил вакцинацию и введение лечебных сывороток, препаратов крови;
отмечается ли повышенная чувствительность к бытовым, пыльцевым, пищевым, эпидермальным аллергенам, косметическим средствам и др.;
менялись ли аллергические проявления с течением времени (локальные проявления или трансформация в полисистемную реакцию).

Лабораторные методы диагностики лекарственной аллергии (in vitro) Необходимо сразу отметить, что даже с позиций сегодняшнего дня ни лабораторная диагностика, ни кожное тестирование не дает 100% гарантии отсутствия или наличия лекарственной аллергии при применении конкретного препарата. Это объясняется тем, что в большинстве случаев лекарственная аллергия развивается не на исходный медикамент, а на продукты его метаболизма, механизмы формирования аллергических реакций также разнообразны и не подтверждаются неким одним универсальным методом. Наконец, в ряде случаев в формировании нежелательной реакции, внешне похожей на аллергическую, вовсе нет иммунных механизмов ( псевдоаллергия). Поэтому отрицательный результат проводимого обследования может свидетельствовать только о низком риске развития аллергии при использовании данного лекарственного препарата.
Общим показанием для лабораторной диагностики является необходимость назначения лекарственного средства при:

наличии в анамнезе аллергических заболеваний;
тяжелых проявлениях лекарственной аллергии (шок и т. д.) в анамнезе;
подозрении на профессиональную лекарственную аллергию;
непереносимости лекарств и исключения аллергической реакции на медикамент;
обширных поражениях кожи и невозможности выполнить кожные пробы;
необходимости обследования на фоне приема антигистаминных препаратов и высоких доз глюкокортикостероидов (ГКС).

Лабораторные методы диагностики направлены на выявление:

специфических IgE;
сенсибилизированных Т-лимфоцитов.

Ранее в диагностике лекарственной аллергии II и III типов важная роль отводилась выявлению специфических IgG и IgM, однако проведенные в последние годы исследования показали их низкую ценность, поскольку они выявляются у каждого принимавшего лекарственный препарат и являются результатом иммунного ответа организма, а не критерием диагностики лекарственной аллергии.
Кроме того, с позиций сегодняшнего дня достоверность старых иммунологических методик (реакция дегрануляции тучных клеток, РПГА и др.) в аллергологии подвергается большому сомнению, поскольку множество внешних и внутренних факторов способны оказать влияние на конечный результат исследования.
В лабораторной диагностике реакций I типа (IgE-зависимых) используют:

определение специфических IgE к определенным медикаментам методом иммуноферментного анализа (ИФА) или радиоаллергенсорбентного теста (РАСТ) с использованием специальных наборов для диагностики лекарственной аллергии «Аллергодиски»;
определение медиаторов аллергического воспаления ( гистамина, триптазы, лейкотриенов) в периферической крови, назальных и бронхиальных секретах и моче. Необходимо отметить, что уровень гистамина в сыворотке крови повышен только в течение первого часа после острой аллергической реакции, а затем он приходит к норме. Повышение уровня триптазы в крови не всегда специфично и выражено через 1 и 6 часов от начала аллергии;
методику CASTs (с целью диагностики лекарственной аллергии), в которой с помощью проточного цитофлюоресциметра определяются активированные базофилы, несущие специфические антигены CD64+ и CD203. К сожалению, из-за высокой стоимости данный метод широко не используется в нашей практике;
реакцию дегрануляции тучных клеток (РДТК). Используют сыворотку крови больных (содержащую IgЕ), тучные клетки крыс и исследуемые лекарственные аллергены. Если в исследуемой сыворотке есть специфические IgЕ против лекарственного агента, они связываются с аллергеном на поверхности тучной клетки, вызывая ее дегрануляцию. Реакцию оценивают микроскопически по изменению морфологии тучных клеток. Число дегранулировавших клеток сравнивают с контрольными образцами (в которых сыворотку больного смешивают с тучными клетками без добавления аллергенов). Реакция считается положительной, если разница дегранулировавших клеток в опытном и контрольном образцах составляет более 20%;
реакцию торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ). РТМЛ in vivo является одновременно лабораторным (подсчет числа лейкоцитов в смывах из полости рта до и после контакта с аллергеном) и провокационным тестом (возможно появление микросимптомов аллергии). Реакция расценивается как положительная, если число лейкоцитов в смывах через 15-30 минут после контакта с аллергеном снижается в 2 или более раза.

Определение специфических IgE свидетельствует о возможности развития лекарственной аллергии I типа с тяжелыми последствиями. Достоверность результатов реакции дегрануляции тучных клеток и реакции торможения миграции лейкоцитов не превышает 60%, однако доступность и дешевизна не позволяют в наших условиях полностью отказаться от их использования.
В лабораторной диагностике реакций II типа (IgE-независимые):

определяют титр комплемента по 50% гемолизу эритроцитов (реакция диагностически значима при исследовании на пике клинических проявлений). В ходе цитотоксической реакции белки комплемента расходуются, титр комплемента снижается. В случае аллергической цитопении отмечаются изменения в анализе периферической крови;
реакция спецгемолиза также может помочь в выявлении виновника аллергической реакции цитотоксического типа, однако для этой методики характерна низкая специфичность.

В лабораторной диагностике реакций III типа (IgE-независимые) применяется:

выявление циркулирующих иммунных комплексов (существуют методики исследования состава иммунных комплексов, а также гистохимического выявления отложений иммунных комплексов в тканях после биопсии);
косвенным признаком иммунокомплексной реакции является снижение титра комплемента (он активируется и расходуется в ходе реакции III типа).

Диагностика лекарственной аллергии IV типа (IgE-независимые) состоит в:

определении наличия сенсибилизированных лимфоцитов (реакция бласттрансформации лимфоцитов в присутствии тех или иных аллергенов с морфологическим учетом бластов), данный метод — один из немногих, который сегодня широко используется в развитых странах;
исследовании продукции цитокинов лимфоцитами после контакта с вероятным аллергеном в реакции торможения миграции лейкоцитов.

________________
Вы читаете тему:
Современные представления о лекарственной аллергии (Артишевский С. Н., Барановская Т. В., Борушко А. И. Белорусская медицинская академия последипломного образования. «Медицинская панорама» № 9, октябрь 2009)

Источник